多重PCR的特點:
高效性:能在同一PCR反應管內同時檢測多種病原微生物,或對有多個型別的目的基因進行分型,特別是用一滴血就可以檢測多種病原體;
系統性:很適合對成組病原體的檢測,如肝炎病毒,腸道致病性細菌,性病,感染性細菌等;
經濟便捷性:同時檢測多種類型的病原可大大節省時間,節省成本,減少實驗的復雜性。
多重PCR設計引物應遵循以下原則:
?、僖镩L度:15-30bp,常用為20bp左右。
?、谝飻U增跨度:以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
?、垡飰A基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
?、鼙苊庖飪炔砍霈F二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
?、菀?'端的堿基,特別是較末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
?、抟镏杏谢蚰芗由虾线m的酶切位點,被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子克隆很有好處。
?、咭锏奶禺愋裕阂飸c核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。