標準細胞RNA提取步驟為液氮研磨--加入RNA裂解--加入氯仿抽提--離心--加入氯丙醇沉淀--離心--酒精洗滌--離心。

　　1.將細胞培養皿置于冰上，加入RNA裂解5-10分鐘，用槍頭輕輕吹打后吸取液體放入進口EP管中。

 

　　2.加入1/5體積的氯仿，上下混勻液體，4度靜置10-15分鐘。（氯仿為有機溶劑，有效的使有機相和無機相迅速分離。有機相中主要是酚和蛋白結合，從而使得蛋白和RNA脫離，RNA進入水相）。

 

　　3.4度離心15分鐘，一定注意選擇低溫離心。離心后分成三層，RNA在上清里，從離心機輕輕拿出EP管，以免管內物質震蕩導致下層沉淀激起。吸取上清的時候一定要動作輕柔，切忌吸取太多，一般吸到400-500ul，避免吸到下層沉淀，將液體置于新的EP管中。

 

　　4.加入等體積異丙醇，4度靜置10min，然后12000rpm離心10min。異丙醇主要用于沉淀RNA。

 

　　5.取出EP管后可以見到側壁沉淀，輕輕吸棄上清。

 

　　6.向EP管中加入75%酒精洗滌沉淀，幫助分離剩余的有機試劑（剩余有機試劑過多會影響OD值和PCR反應），輕彈沉淀，使其浮在酒精，靜置1-2min，讓酒精充分接觸沉淀，充分溶解有機試劑，然后4度離心5min。輕輕吸棄上清。

 

　　7.將EP管再次放于離心機中瞬時離心，棄掉管壁殘余液體。然后將EP管置于超凈臺中干燥5-10min.。注意RNA樣品不要過于干燥，否則很難溶解。

 

　　8.加入50ulDEPC處理水，震蕩充分溶解沉淀。

 

　　9.測量RNA濃度。將RNA保存于-80度。