口腔拭子DNA樣本采集步驟:
1、手持棉簽,伸進口腔,從口腔內側頰粘膜處(腮幫子內側)反復擦拭(不時旋轉棉棒),取出棉簽陰干。
2、選擇不同的口腔壁以同樣的方法采集第二根棉簽,每個人要提取5-10根棉簽。
3、注意室溫風干后,用保鮮膜包好再郵寄。
口腔拭子DNA的操作步驟:
1、取4μl血液(或3×3mm2血斑樣品)放入0.5ml的離心管中,加入0.5ml純水,振蕩混勻,室溫浸泡15-30分鐘。2、13,000rpm離心3分鐘,去除上清液〔上清液可用于做抗人血紅蛋白(FOB)金標試劑條檢驗〕,若是血斑則保留載體。
3、加入200μl5%Chelex-100溶液,56oC保溫15-30分鐘,振蕩5-10秒。
4、沸水中煮8分鐘(或在熱循環儀上100oC保溫8分鐘),振蕩5-10秒。
5、13,000rpm離心3分鐘,4oC保存備用。
口腔拭子DNA的注意事項:
1、5%Chelex-100溶液使用前搖勻,用量視檢材的量而定。
2、液體血用EDTA溶液(0.5MEDTA:血=50μl:3ml)或枸櫞酸鈉溶液(2.5%枸櫞酸鈉:血=1:4)抗凝,冷藏送檢。
3、液體血涂在濾紙或脫脂紗布上制成血斑時,應在室溫下自然晾干,放入紙袋內送檢。
4、血斑應保留載體,皮革上的血跡較好用紗線轉移提取。
5、純水洗一次后,若顏色還很紅,可用水再洗一遍。
6、微量血斑可不經水洗,直接加入適量5%Chelex-100溶液保溫。
7、陳舊血斑可加入蛋白酶K,并適當延長保溫時間。